Ломоносовская премия - 1984: С.Е.Северин

В 1975 г. Келером и Мильштейном было показано, что при слиянии клеток миеломы с селезёночными клетками из иммунизированных животных могут продуцироваться гибридные клеточные линии, которые секретируют антитела против иммунизирующих антигенов. После того как гибридная клеточная линия получена, она является бессмертной и может быть продуцентом неограниченного количества моноклональных антител. Северин с сотрудниками использовал эту технологию для получения моноклональных антител к ряду ферментов, играющих ключевую роль в регуляции метаболизма клетки. В качестве антигенов были выбраны: антигены возбудителей особо опасных инфекций – капсульный антиген чумного микроба и антиген холерного вибриона – холерный токсин; вирусный антиген – ротавирус, являющийся возбудителем кишечных заболеваний детей первого года жизни и молодняка крупного рогатого скота; растительный белок – легумин, определяющий пищевую ценность бобовых и служащий основным критерием при селекции высокопродуктивных сортов бобовых.

Общая схема получения моноклональных антител к вышеперечисленным антигенам включала следующие этапы: иммунизация мышей определённым антигеном, слияние клеток иммунной селезёнки с культуральными клетками миеломы, селекция специфических гибридов, наращивание специфических гибридомных клеток, наработка необходимого количества моноклональных антител в асцитных опухолях сингенных мышей, очистка и исчерпывающая характеристика моноклональных антител.

Было получено не менее 5 клонов специфических гибридом для каждого из антигенов. Были выбраны гибридомы, продуцирующие высокоаффинные антитела и подобраны пары моноклональных антител для «сэндвич»-метода иммуноферментного анализа каждого из антигенов. Сутью этого метода является такая постановка анализа, при которой одно из моноклональных антител служит подложкой, на которую «садятся» специфические искомые антигены, а другое моноклональное антитело, конъюгированное с ферментом пероксидазой служит для выявления антигена. Количество антигена пропорционально яркости окраски, образующейся при расщеплении пероксидазой субстрата с образованием окрашенных продуктов реакции.

Этим принципам, с учётом различных модификаций для каждого из антигенов, следовали при разработке всех четырёх наборов. Итогом работы явилось создание следующих иммуноферментных наборов на основе моноклональных антител: для выявления чумного микроба; для выявления токсигенных штаммов холерных вибрионов и контроля за качеством вакцин; для выявления ротавируса; для определения легумина.

Следует отметить высочайшую чувствительность и специфичность наборов, а также их оригинальность – все наборы были получены впервые.